上海起發(fā)paratechs 60010說(shuō)明書(shū)

mNSET Device for Mice 60010 Instructions for Non-Surgical Embryo Transfer

產(chǎn)品信息
目錄#60010
EtO（環(huán)氧乙烷）滅菌處理
每盒10個(gè)器械（器械單獨(dú)包裝，每個(gè)密封袋中有1個(gè)小窺器和1個(gè)大窺器。）
信息：非手術(shù)胚胎移植方法和設(shè)備，美國(guó)9615903。[PDF]
預(yù)期用途
該裝置用于將小鼠胚胎經(jīng)宮頸倫理轉(zhuǎn)移到受體雌性小鼠體內(nèi)。僅用于研究目的。不用于人類(lèi)或動(dòng)物的診斷或治療用途。
其他用途：mNSET 60010裝置也可用于人工授精（AI）或其他材料/病原體轉(zhuǎn)移到受體雌性小鼠體內(nèi)。對(duì)于更大容量的傳輸，請(qǐng)考慮容量為20-40µl的mC&I設(shè)備（60020）。
處理
設(shè)備僅限一次性使用。使用后丟棄。
mNSET胚胎移植前
為了生產(chǎn)用于移植的小鼠胚胎和作為受體的假懷孕雌性，使用標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因方法。¹按照標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因程序，與雄性和雌性小鼠進(jìn)行交配。如果需要，女性供體可以進(jìn)行超排卵。胚胎在EmbrysMax®KSOM培養(yǎng)基（Millipore#MR-106-D）或所需培養(yǎng)基中孵育。胚胎應(yīng)在交配后3.5天（3.5dpc）進(jìn)行mNSET移植；受體雌性小鼠在mNSET轉(zhuǎn)移當(dāng)天應(yīng)為2.5dpc。
mNSET演示視頻
快速程序和完整程序演示視頻可在此處查看和下載?？焖俪绦蛞曨l演示了使用mNSET如何輕松完成小鼠子宮胚胎移植™ （非手術(shù)胚胎和精子移植）小鼠裝置60010。整個(gè)過(guò)程視頻詳細(xì)介紹了整個(gè)設(shè)置和準(zhǔn)備過(guò)程，直到實(shí)際過(guò)程結(jié)束。
胚胎移植程序
1.將15μl培養(yǎng)基滴到60mm組織培養(yǎng)皿（Falcon 353002或類(lèi)似物）的蓋子上。
2.使用標(biāo)準(zhǔn)胚胎處理移液管將12–20個(gè)囊胚加載到培養(yǎng)基中。（注意：移植胚胎的最佳數(shù)量將根據(jù)小鼠品種和胚胎接受的操作而變化。）
3.將mNSET裝置放置在已設(shè)置為1.8μl的P-2移液管上（推薦的移液管為Rainin Classic PR2移液管，0.1-2μl或Gilson移液管P2，0.2-2μl）
4.將移液管柱塞按到第一個(gè)停止位置，將mNSET裝置的尖d降低到培養(yǎng)基中，然后將胚胎緩慢拉入尖d。從介質(zhì)上取下mNSET裝置尖d。
5.小心地將移液管設(shè)置為2.0μl，以在mNSET尖d產(chǎn)生一個(gè)小氣泡，以確保胚胎在插入小鼠期間留在裝置尖d內(nèi)。輕輕地將移液管放置在一邊（靠近籠子），以便在步驟9中使用。避免碰撞mNSET尖d。
6.將未麻醉的受體雌鼠放在帶有金屬絲架的籠子頂部，讓鼠標(biāo)“抓住”籠子桿表面。用拇指和食指抓住尾巴底部，將尾巴向上傾斜，同時(shí)用手的另一邊輕輕按壓尾巴底部。

小鼠用mNSET設(shè)備60010有用提示
以下是我們的科學(xué)家、技術(shù)人員和客戶(hù)提供的提示和建議，這些提示和建議被證明是有用的。
1.在開(kāi)始mNSET試驗(yàn)之前，請(qǐng)仔細(xì)閱讀所有“有用提示”和mNSET for Mouse 60010說(shuō)明書(shū)。指令插入可以在NSET的每個(gè)框中找到。
2.在實(shí)際實(shí)驗(yàn)之前，在沒(méi)有胚胎的2.5 dpc假懷孕小鼠上練習(xí)mNSET技術(shù)。
3.mNSET設(shè)計(jì)為緊貼Rainin Classic PR2，0.1-2µl或Gilson Pipetman P2，0.2-2µl移液管，用于裝載胚胎并精確測(cè)量設(shè)備尖d的培養(yǎng)基。
4.我們建議使用有意識(shí)、冷靜和未交配的小鼠。這使得小鼠更容易在自然位置找到并進(jìn)入子宮頸。我們網(wǎng)站上視頻中的雌性老鼠沒(méi)有服用鎮(zhèn)靜劑。
5.我們使用CD1小鼠，強(qiáng)烈建議將該菌株用于假妊娠受體。我們建議使用體重≥26g且至少60天大的小鼠。
6.胚胎應(yīng)孵育至囊胚期（e3.5），因?yàn)樵撛O(shè)備將它們轉(zhuǎn)移到子宮角之一而不是輸卵管。一些最終用戶(hù)已成功使用桑椹胚。
7.選擇一種你使用過(guò)的培養(yǎng)基，它能讓你在孵化胚胎時(shí)獲得*佳成功。例如，使用M2或KSOM培養(yǎng)基，移植12至20個(gè)胚胎。
8.mNSET裝置僅能在發(fā)情的某些階段以及在假懷孕小鼠中以2.5dpc通過(guò)子宮頸。因此，我們強(qiáng)烈建議使用2.5 dpc假懷孕小鼠（塞子脫落后）進(jìn)行訓(xùn)練和使用mNSET裝置進(jìn)行胚胎移植。
9.我們發(fā)現(xiàn)，將老鼠放在籠子頂部，用鐵絲架讓它抓住籠子桿表面，這樣可以相對(duì)容易地讓雌性動(dòng)物保持靜止，減少蠕動(dòng)。使用mNSET說(shuō)明第6條中所述的保持技術(shù)，
10.我們不建議使用潤(rùn)滑劑。您可以使用無(wú)菌水或培養(yǎng)基濕潤(rùn)窺器，然后在插入陰道之前去除多余的水分。
11.將小窺器輕輕插入陰道。老鼠天生會(huì)把窺器推出一點(diǎn)。輕輕地將其壓回原位，使mNSET裝置可以穿過(guò)子宮頸并進(jìn)入子宮角之一。
12.可選：取下小窺器，更換為大窺器。如果需要，使用適當(dāng)?shù)墓庠矗琦Z頸燈，并觀(guān)察宮頸。
13.使用NSET尖d發(fā)現(xiàn)和穿透宮頸時(shí)，要耐心，不要施加太大壓力。這可能會(huì)導(dǎo)致組織損傷，并可能使mNSET裝置尖d彎曲，使其幾乎無(wú)法使用。如果第一次嘗試插入mNSET的位置不正確，請(qǐng)輕輕重新定位設(shè)備并重復(fù)。
14.如果在發(fā)現(xiàn)頸部開(kāi)口時(shí)施加過(guò)大壓力，導(dǎo)致尖d彎曲，則可能發(fā)生胚胎丟失。同樣，溫和的反復(fù)嘗試與mNSET的成功有關(guān)。
15.當(dāng)mNSET裝置的轂接觸窺器末端時(shí)，您將知道該裝置通過(guò)宮頸正確插入子宮。
16.要排出胚胎，請(qǐng)將移液管柱塞按到第一個(gè)停止位置。數(shù)到3。不要松開(kāi)柱塞。
17.在不釋放移液管柱塞的情況下緩慢移除mNSET。如果在取出之前釋放柱塞，一些胚胎可能會(huì)被拉回尖d。
18.使用后在顯微鏡下檢查mNSET尖d是良好的做法。清晰的尖dmNSE顯示尖d內(nèi)部的可視化效果。
該設(shè)備僅設(shè)計(jì)用于一次性使用。重復(fù)使用會(huì)用宮頸組織堵塞mNSET尖d。重復(fù)使用可能會(huì)使導(dǎo)管變得柔韌，不再堅(jiān)硬，無(wú)法通過(guò)宮頸。因此，可能會(huì)將胚胎植入陰道，而不是預(yù)期的子宮角。