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assayquant用于靶標(biāo)生物學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)與開發(fā)的酶和抑制劑活性測定

更新時間:2022-07-11      點(diǎn)擊次數(shù):1148


使用新型傳感器-肽底物對酶和抑制劑活性進(jìn)行熒光微孔板檢測的強(qiáng)大組合

assayquant用于靶標(biāo)生物學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)與開發(fā)的酶和抑制劑活性測定

AssayQuant 的PhosphoSens ® 技術(shù)構(gòu)成了其廣泛的 400 多種*的酶和抑制劑檢測產(chǎn)品組合的基礎(chǔ)。每種檢測都具有以試劑盒或散裝傳感器肽形式提供的新型傳感器肽底物,并且作為相關(guān)的獨(dú)立試劑家族,每個成分都經(jīng)過仔細(xì)測試,以確保其經(jīng)過優(yōu)化以用于適用的檢測。散裝試劑以折扣價提供,適用于高通量或大容量應(yīng)用。

我們提供兩種檢測形式:連續(xù)和終點(diǎn)/紅色。兩種格式都與 96、384 和 1536 孔板兼容,并產(chǎn)生與測量時反應(yīng)混合物中磷酸化產(chǎn)物的量成正比的信號。在這兩種情況下,效力結(jié)果均與基于細(xì)胞的檢測結(jié)果一致,加速并改進(jìn)了先導(dǎo)識別、表征、分析和優(yōu)化研究,從而有可能更快地開發(fā)出更有效的藥物。

兩種分析形式都與廣泛的 ATP 濃度(包括低至生理 [mM] 水平)*兼容,并使用生理 Mg ++、 Mn ++、 Ca ++離子濃度和源自已知底物的肽序列。使用我們的選擇性 PhosphoSens 底物,可以使用粗制細(xì)胞或組織裂解物進(jìn)行檢測,提供更多生理環(huán)境,包括測量活細(xì)胞中形成的功能性復(fù)合物中激酶的活性。


                                                                                                                                                               

貨號品名規(guī)格品牌
CSKS-AQT0101PhosphoSens Kit1mgAssayQuant
CSKS-AQT0734BULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0734 , Peptide substrate, 1mg net lyophilized1mgAssayQuant
CSKS-AQT0157PEPTIDE SUBSTRATE1mgAssayQuant
AQT0449PhosphoSensKit1mgAssayQuant
AQT0733PhosphoSensKit1mgAssayQuant
AQT0255BPEPTIDE SUBSTRATE1mgAssayQuant
CSKS-AQT0296BBULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0296, Peptide substrate, 1mg net lyophilized1mgAssayQuant
CSKS-AQT0258BPEPTIDE SUBSTRATE1mgAssayQuant
CSKS-AQT0297BPEPTIDE SUBSTRATE1mgAssayQuant
CSKS-AQT0104PEPTIDE SUBSTRATE1mgAssayQuant
AQT0691PLK11mgAssayQuant
AQT0515Cysteine Sox Kinase Sensor1mgAssayQuant
AQT0536PhosphoSensKit1mgAssayQuant
AQT0297PhosphoSensKit1mgAssayQuant
AQT0258PhosphoSensKit1mgAssayQuant
AQT0001PhosphoSensKit1mgAssayQuant
AQT5050mM(50*)Europium15mlAssayQuant
CSKS-AQT0255BBULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0255, Peptide substrate, 1mg net lyophilized1mgAssayQuant
CSKS-AQT0459BBULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0459 , Peptide substrate, 1mg net lyophilized1mgAssayQuant

 

連續(xù)測定

PhosphoSens 連續(xù)測定利用簡單的添加和讀取協(xié)議,提供實時動態(tài)測量的能力,以及直接的熒光強(qiáng)度測量。這些測定通過允許測量初始反應(yīng)速率(測量為初始線性區(qū)域的斜率)來提供高準(zhǔn)確度和精確度,通常在前 30-60 分鐘內(nèi)并包括許多數(shù)據(jù)點(diǎn),每 30 秒到 2 分鐘執(zhí)行一次讀數(shù). 這種連續(xù)測定形式還允許校正化合物自發(fā)熒光,因為此背景信號不會隨時間而變化,并且可以通過從總熒光(包括酶在內(nèi)的所有成分)中減去背景信號(包括化合物和反應(yīng)的所有成分)來校正,以確定每個時間點(diǎn)的凈信號. 連續(xù)格式基本上與任何市售的能夠進(jìn)行動力學(xué)讀數(shù)的熒光酶標(biāo)儀以及相關(guān)的實驗室自動化設(shè)備兼容。不需要停止溶液或淬火/顯影步驟,最大限度地減少時間,同時最大限度地提高產(chǎn)量。 

終點(diǎn)檢測

由于許多化合物庫都包含自發(fā)熒光化合物,AssayQuant 提供的 PhosphoSens Red 分析允許在更長(>600 nm)波長下進(jìn)行檢測,具有相同的最大激發(fā),并使用時間分辨熒光。我們建議在發(fā)射波長處使用 100 µs 的激發(fā)和檢測延遲,采集時間為 300 µs,以避免來自反應(yīng)混合物中熒光材料的信號污染,這些材料的壽命非常短(納秒)。我們的終點(diǎn)檢測使用與我們的連續(xù)檢測相同的反應(yīng)設(shè)置,一旦反應(yīng)運(yùn)行,將向每個孔中添加基于銪離子 (Eu 3+ ) 的試劑,以取代 Mg ++在螯合復(fù)合物中。Sox 熒光團(tuán)的激發(fā)使銪發(fā)光敏感,產(chǎn)生最大 615 nm(紅色)的光,可以使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片進(jìn)行測量。PhosphoSens Red 檢測通??梢允褂门c連續(xù)格式相同的 PhosphoSens 底物。然而,一些高酸性底物(例如,那些常用于酪氨酸激酶的底物)可能會導(dǎo)致紅色格式的低信噪比。為了解決這種情況,我們已經(jīng)確定了替代傳感器肽序列,這些序列允許優(yōu)化 PhosphoSens Red 測定,信號與背景比為 2 或更高,提供 0.7 或更高的 Z' 值(0.5 被認(rèn)為是好的)。在這些情況下,相同的序列可用于連續(xù)格式,

三個酶檢測家族和一個強(qiáng)大的檢測生成過程

除了我們的連續(xù)和終點(diǎn)/紅酶和抑制劑活性檢測外,AssayQuant 還提供三種不同酶家族的檢測:蛋白激酶、蛋白磷酸酶和脂質(zhì)激酶。如我們的技術(shù)頁面所述,所有 AssayQuant 蛋白激酶和磷酸酶測定均基于使用基于熒光傳感器肽的底物。使用脂質(zhì) (DAG) 底物的脂質(zhì)激酶(二酰基甘油激酶或 DGK)目前僅作為 AssayQuant測試服務(wù)的一部分提供。

 

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