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ArcticZymes C5029說明書
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| 熱敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是來源于嗜冷海洋細(xì)菌經(jīng)大腸桿菌表達(dá)純化的的重組蛋白，又稱南極熱敏UDG。該熱敏UDG酶能有效地水解單鏈或雙鏈 DNA 上的尿嘧啶，產(chǎn)生的缺嘧啶位點(diǎn)，在高溫或高 pH 下，極易水解斷裂。該酶對(duì)RNA無活性，主要用于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染。大腸桿菌來源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶較為耐熱，經(jīng)95℃10min處理仍會(huì)殘留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基化酶活性，導(dǎo)致含有dU堿基的PCR產(chǎn)物的降解。而來源于嗜冷海洋細(xì)菌的熱敏UDG在50℃ 5min即*失活，在進(jìn)行PCR擴(kuò)增前，在PCR混合液中添加尿嘧啶-DNA 糖基化酶（熱敏性），25℃10min即可消除PCR產(chǎn)物的殘留污染，由于尿嘧啶-DNA 糖基化酶（熱敏性）在PCR循環(huán)的94℃變性一步便可被滅活，因此不會(huì)影響新的含dU的PCR產(chǎn)物。 | ||||||||||
組分 | ||||||||||
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應(yīng)用 | ||||||||||
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活性定義 | ||||||||||
| 在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下，37°C每分鐘催化 60 pmol 尿嘧啶從含尿嘧啶的雙鏈 DNA 上釋放所需要的酶量為一個(gè)活性單位。 | ||||||||||
反應(yīng)buffer | ||||||||||
| Heatlabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)與絕大多數(shù)的PCR 聚合酶反應(yīng)緩沖液都是兼容的，但在高離子濃度(>100mM)下活性會(huì)受到抑制。 | ||||||||||
酶保存液 | ||||||||||
| 20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。 | ||||||||||
儲(chǔ)存 | ||||||||||
| -20℃可保存2年，避免反復(fù)凍融。 | ||||||||||
熱失活 | ||||||||||
| 50℃，10min。 | ||||||||||
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