mypols Volcano3G說明書
“ myPOLS認(rèn)為,RT-qPCR應(yīng)該與qPCR一樣簡單。要定量DNA還是RNA模板都沒有關(guān)系??紤]到這一點(diǎn),我們開發(fā)了Volcano3G RT-PCR主混合物。”
Volcano3G RT-PCR預(yù)混液可通過快速簡便的PCR方案擴(kuò)增RNA或DNA靶序列,甚至包括0步擴(kuò)增。
此外,淺藍(lán)色提高了移液步驟中混合物的可見度,尤其是在使用白色或透明孔板時(shí)。
該混合物適用于DNA和RNA模板的qPCR,適用于GreenDye或基于探針的測定。
所有這些都以可與標(biāo)準(zhǔn)qPCR混合物媲美的高度兼容的價(jià)格提供。
Volcano3G RT-PCR 2x預(yù)混液(+ GreenDye,+ ROX)是現(xiàn)成的預(yù)混液,可用于所有標(biāo)準(zhǔn)PCR循環(huán)儀中的可靠qPCR和RT-PCR。該混合物包含一種穩(wěn)健的Taq DNA聚合酶和一種具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的經(jīng)過工程改造的熱穩(wěn)定DNA聚合酶的酶混合物。它補(bǔ)充了GreenDye(#2000),這是一種具有低聚合酶抑制作用的高敏感性DNA結(jié)合染料,也可以是高濃度或低濃度的ROX參考染料。這種混合物適用于高分辨率熔解實(shí)驗(yàn)。
也可提供不含ROX參考染料(#6301)的Volcano3G RT-PCR 2x預(yù)混液(+ GreenDye )。對(duì)于基于探針的PCR檢測,我們建議使用Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix,該混合物已針對(duì)(多重)探針測定進(jìn)行了優(yōu)化。也可以在有或沒有ROX參考(#6201,#6101)的情況下使用。
Volcano3G RT-PCR 2x預(yù)混液包含熱啟動(dòng)酶配制的酶混合物,該酶混合物具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性和穩(wěn)定的Taq DNA聚合酶,是一種經(jīng)過工程改造的熱穩(wěn)定DNA聚合酶。將混合物與超純dNTP,GreenDye(DNA結(jié)合染料)和緩沖液成分預(yù)混合,以創(chuàng)建可立即使用的2x主混合物,以可靠地檢測RNA和DNA靶標(biāo)。
該產(chǎn)品以涼爽包裝出售。建議在抵達(dá)時(shí)將產(chǎn)品存放在-20°C下。
RT-PCR活性:已對(duì) Volcano3G RT-PCR Mix進(jìn)行了成功的RT-PCR性能測試。在實(shí)時(shí)PCR循環(huán)儀中從人總RNA提取物中擴(kuò)增出151 bp片段(HPRT1 mRNA),并可視化為單個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物。
DNA聚合酶活性:使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)控Volcano3G DNA聚合酶活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。
使用Volcano3G RT-PCR預(yù)混液,RT-PCR變得更加容易。Volcano3G RT-PCR預(yù)混液可通過快速簡便的PCR方案擴(kuò)增RNA靶序列,甚至包括0步擴(kuò)增。
Volcano3G是性能改進(jìn)的下一代Volcano2G。它為精確,快速的qPCR提供了多種應(yīng)用。它適用于常見的熱循環(huán)方案和直接來自RNA的“零步長” RT-PCR方案。如此處所示,通過使用基于探針的qPCR分析和常見的熱RT-PCR方案,可以在10倍稀釋系列中檢測到人工HPRT1 mRNA。
Volcano3G顯示了對(duì)多達(dá)500個(gè)總拷貝的mRNA檢測的改進(jìn),這與無模板對(duì)照(NTC)明顯不同。Volcano 3G Master Mix提供的更明亮的熒光信號(hào)使定量分析變得簡單而精確。Volcano3G RT-PCR混合物比我們的Volcano2G RT-PCR混合物靈敏度高10倍。在這里,Volcano3G RT-PCR 2x Master混合物檢測到人為HPRT1 mRNA低至500拷貝,其中含有敏感的DNA結(jié)合染料,聚合酶抑制作用可忽略不計(jì)。
具有GreenDye的Volcano3G RT-PCR 2x預(yù)混液適用于高分辨率熔解(HRM)實(shí)驗(yàn),可讓您快速識(shí)別非特異性擴(kuò)增子,從而在優(yōu)化PCR時(shí)節(jié)省時(shí)間和精力。
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