上海起發(fā)現(xiàn)貨omegabiotek D6943說明書
使用旋轉(zhuǎn)微型柱從1-5 mL細菌培養(yǎng)物中分離質(zhì)粒DNA
SKU: D6943
Category: Bacterial Plasmid
EZNA®Plasmid Mini Kit I旨在在30分鐘或更短的時間內(nèi)從1-5 mL細菌培養(yǎng)物中分離出多達30 µg的高質(zhì)量質(zhì)粒DNA。利用HiBind®Mini Column技術(shù)將質(zhì)粒DNA純化簡化為三個快速步驟:結(jié)合,洗滌和洗脫。純化的質(zhì)粒DNA立即可用于多種下游應(yīng)用,例如常規(guī)篩選,限制性內(nèi)切酶消化和手動/自動熒光DNA測序。
EZNA®Plasmid Mini Kit備有2種不同類型的色譜柱:V型旋轉(zhuǎn)色譜柱有一個帶蓋(D6943),而Q型旋轉(zhuǎn)色譜柱沒有蓋(D6942)。在其他方面,這些列在使用和應(yīng)用上是相同的。兩種色譜柱均可用于真空或離心方案。
僅供研究使用。不用于診斷過程。
特征 | 技術(shù)指標 |
---|---|
下游應(yīng)用 | 克隆; 危險的排序,轉(zhuǎn)換等 |
起始原料 | 1-5 mL LB培養(yǎng) |
質(zhì)粒類型 | 高拷貝,低拷貝粘粒DNA |
處理方式 | 手動,離心或真空 |
通量 | 1-24 |
DNA結(jié)合技術(shù) | 硅膠微型旋轉(zhuǎn)柱 |
裂解液清除方法 | 離心分離 |
處理時間 | <30分鐘 |
產(chǎn)量 | 15-25 µg(高拷貝數(shù));0.1-5 µg(低拷貝數(shù)) |
特別說明 | 終止酵母質(zhì)粒試劑盒的替代品 |
項目 |
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HiBind®DNA微型柱 |
2 mL收集管 |
解決方案一 |
解決方案二 |
解決方案三 |
HBC緩沖液 |
DNA洗滌緩沖液 |
核糖核酸酶A |
洗脫緩沖液 |
DNA濃度比較
圖1. 根據(jù)制造商推薦的方案進行了用pGEM載體轉(zhuǎn)化的4 mLDH5α培養(yǎng)物。通過用NanoDrop®2000c進行光密度測量來確定質(zhì)粒DNA濃度??傁疵擉w積為50 µL。
超卷DNA
圖2. 根據(jù)標準方案分離了用pGEM載體轉(zhuǎn)化的1 mLDH5α培養(yǎng)物。在1%瓊脂糖凝膠上分析5 µL洗脫質(zhì)粒DNA。
通過Nanodrop進行DNA定量
表1. 用pGEM載體轉(zhuǎn)化的1 mLDH5α培養(yǎng)物。通過用NanoDrop®2000c進行光密度測量來確定質(zhì)粒DNA濃度。總洗脫體積為50 µL。
桑格測序
表2. 用EZNA Plasmid Mini Kit I純化的質(zhì)粒DNA用于5 µL Sanger測序反應(yīng)。在Applied Biosystems 3730XL上分析DNA。
內(nèi)毒素水平
表3. 質(zhì)粒DNA制備物中的內(nèi)毒素。按照每個制造商推薦的方案,從0.8 mL LB培養(yǎng)物中分離質(zhì)粒DNA。內(nèi)毒素水平用Thermo Scientific的Pierce LAL生色內(nèi)毒素定量試劑盒測定。
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