myPOLS Biotec正在開發(fā)新一代的DNA聚合酶

用于和可靠的應(yīng)用，例如個性化醫(yī)療，病原體檢測，DNA和RNA診斷，法醫(yī)學(xué)等等。

我們的研發(fā)活動包括：

• 改進(jìn)的DNA聚合酶用于SNP檢測和甲基化特異性PCR。
• 病原體檢測分析，例如用于流感和諾如病毒診斷。
• 具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的熱穩(wěn)定DNA聚合酶。
• 抑制劑抗性聚合酶，用于從樣品中直接PCR，如全血，唾液，細(xì)菌，細(xì)胞 - 顆粒，植物等。 

后但并非不重要：我們所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內(nèi)部生產(chǎn)的，并經(jīng)過常規(guī)測試，符合高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學(xué)的生物技術(shù)公司，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們在高通量DNA聚合酶設(shè)計方面的專業(yè)知識，我們?yōu)槟膽?yīng)用定制酶。

RRNA / RT-PCR

Volcano2G DNA聚合酶

是原始Volcano DNA聚合酶的下一代，具有進(jìn)一步改善的逆轉(zhuǎn)錄活性。該酶是一種工程化的，極其熱穩(wěn)定的逆轉(zhuǎn)錄酶和組合的DNA聚合酶，通過定向的人工進(jìn)化獲得。
Volcano2G DNA聚合酶直接從RNA模板促進(jìn)“零步驟”RT-PCR（沒有等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟），因?yàn)樵谘h(huán)PCR延伸步驟期間逆轉(zhuǎn)錄與DNA擴(kuò)增同時發(fā)生。這也允許在高溫下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，從而小化在高溫下熔化的RNA中的強(qiáng)二級結(jié)構(gòu)遇到的問題。

更簡單，更快捷：0步RT-PCR協(xié)議：

跳過逆轉(zhuǎn)錄步驟。不需要等溫反轉(zhuǎn)錄步驟。 

Volcano2G是一種PCR活性逆轉(zhuǎn)錄酶，具有*的熱穩(wěn)定性，在95°C的半衰期> 40 min。

當(dāng)添加實(shí)時PCR染料時，Volcano2G DNA聚合酶也可用于實(shí)時PCR。Volcano2G具有Taq DNA聚合酶樣核酸酶結(jié)構(gòu)域，因此也適用于基于水解探針的分析。如此處所示，通過使用基于探針的qPCR測定和零步驟RT-PCR方案，使用10倍稀釋系列的總RNA檢測NONO mRNA：

詳細(xì)的產(chǎn)品說明

Volcano2G 5x反應(yīng)緩沖液針對擴(kuò)增子大小在60-300bp之間進(jìn)行了優(yōu)化。

當(dāng)添加合適的實(shí)時PCR染料或熒光探針時，Volcano2G逆轉(zhuǎn)錄酶也可用于實(shí)時PCR。
這種*的酶能夠進(jìn)行基于PCR的RNA檢測，無需單獨(dú)的逆轉(zhuǎn)錄步驟。
Volcano2G逆轉(zhuǎn)錄酶可以可靠地檢測≥1ng總RNA輸入的RNA靶標(biāo)。

Volcano2G DNA聚合酶不需要Mn 2+  以獲得宜活性。然而，通過向反應(yīng)中添加Mn 2+可以進(jìn)一步優(yōu)化一些測定（建議的范圍是0.5-1mM，未提供Mn 2+）。

質(zhì)量控制

RT-PCR活性：測試Volcano2G DNA聚合酶活性的成功RT-PCR性能。在PCR循環(huán)儀中從人總RNA提取物擴(kuò)增151bp片段（HPRT1 mRNA），并將其顯示為單一擴(kuò)增產(chǎn)物。
DNA聚合酶活性：已經(jīng)使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)測Volcano2G聚合酶活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。
通過蛋白質(zhì)特異性染色確定酶濃度。有關(guān)批次特定濃度，請通過info@mypols.de查詢更多信息。

存儲

本產(chǎn)品采用冷藏包裝。請在抵達(dá)-20°C時存放產(chǎn)品。

應(yīng)用

• 快速檢測和鑒定RNA靶標(biāo)
• 逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）
• 實(shí)時RT-PCR
• SELEX
• 入門擴(kuò)展

反應(yīng)設(shè)置

將所有組件保存在冰上。
在使用前仔細(xì)旋轉(zhuǎn)并混合所有溶液。

*推薦的終模板濃度在5-50 ng /μl之間。 

典型的0步RT-PCR方案（不需要等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟）

可以使用兩步法和三步法PCR方案。
*通過運(yùn)行溫度梯度來理想地建立新的PCR，以便找到每個引物對的宜退火/延伸溫度。引物的退火溫度受其核酸序列和反應(yīng)緩沖液組成（鹽和pH）的強(qiáng)烈影響。Volcano2G DNA聚合酶在50-95°C之間活躍。

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