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Enzymatics L6090L 說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2018-04-11      點(diǎn)擊次數(shù):1260

 

 

貨號(hào):L6090L

品名:E. coli DNA Ligase(大腸桿菌DNA連接酶)

產(chǎn)品描述:

大腸桿菌 DNA連接酶催化DNA末端的相鄰5'磷酸和3'羥基之間形成磷酸二酯鍵,需要NAD +和Mg 2+作為輔因子。相對(duì)于粘性DNA末端連接和缺口密封,平末端DNA的連接是非常低效的。

 

規(guī)格:

2,500 U

濃度

10,000 U/ml

保存

-25°C至-15°C

純度(SDS-PAGE)

> 99%

活性:

20,000 - 28,880 U/mg

SS核酸外切酶

100 U < 2.0% released

DS核酸外切酶

100 U < 1.0% released

DS內(nèi)切核酸酶

100 U = no conversion

大腸桿菌 DNA污染

50 U <10 copies

 

蛋白質(zhì)來(lái)源

大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒編碼大腸桿菌DNA連接酶的基因。

 

提供

10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25℃

 

隨附:

 

B6090 (10X E.coli DNA Ligase Reaction Buffer)

10X E.coli DNA Ligase Reaction Buffer (B6090):
300 mM Tris-HCl
40 mM MgCl2
260 uM NAD
10 mM DTT
0.5 mg/mL BSA

 

單位定義 
1單位定義為在25℃下30分鐘內(nèi)連接100ng DNA的片段的50%與粘性末端所需的大腸桿菌 DNA連接酶的量。

 

質(zhì)量控制分析

 

單位表征測(cè)定
單位活性使用2倍系列稀釋法測(cè)量。在1X反應(yīng)緩沖液中制備酶的稀釋液并加入到20μL含有雙鏈DNA的片段和1X反應(yīng)緩沖液的反應(yīng)中。將反應(yīng)在25℃(室溫)孵育30分鐘,在冰上浸入,并在用溴化乙錠染色的1%瓊脂糖凝膠上分析。

 

蛋白質(zhì)濃度(OD 280)測(cè)量使用使用2.0mg / ml BSA樣品(Pierce Cat#23209)標(biāo)準(zhǔn)化的Nanodrop ND-2000分光光度計(jì)
在OD 280處分析2.0μL酶樣品,并用產(chǎn)品儲(chǔ)存溶液沖切。使用34,280的消光系數(shù)和73,606道爾頓的分子量將觀察到的3個(gè)重復(fù)樣品的平均測(cè)量結(jié)果轉(zhuǎn)換為mg / mL。

 

SDS-Page(物理純度評(píng)估)

將2.0μL酶溶液加載到變性的4-20%Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上,該凝膠側(cè)翼為寬范圍的MW標(biāo)記和2.0μL的1:100稀釋的樣品。電泳后,將凝膠染色并比較樣品以確定物理純度。該測(cè)試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過(guò)稀釋樣品中目的蛋白質(zhì)條帶的質(zhì)量,確認(rèn)濃縮樣品的純度大于99%。

 

污染測(cè)試

 

單鏈核酸外切酶活性

將含有10,000cpm放射性標(biāo)記的單鏈DNA底物和10μl酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí),導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放小于2.0%。


雙鏈核酸外切酶活性將含有5,000cpm放射性標(biāo)記的雙鏈DNA底物10μl的50μL反應(yīng)液和在37℃下孵育4小時(shí)的酶溶液導(dǎo)致少于1.0%的TCA可溶性計(jì)數(shù)釋放。


雙鏈核酸內(nèi)切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和100單位酶溶液的50μL反應(yīng)液在37℃下溫育4小時(shí),結(jié)果通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定,沒(méi)有視覺(jué)上可辨別的轉(zhuǎn)化為帶切口的環(huán)狀DNA。

 

腸桿菌 16S rDNA污染測(cè)試
將酶溶液的重復(fù)樣品變性,并使用對(duì)應(yīng)于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物,在TaqMan qPCR測(cè)定中篩選污染性大腸桿菌基因組DNA的存在。測(cè)試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)是由3個(gè)重復(fù)的無(wú)模板對(duì)照樣品的平均值產(chǎn)生的閾值循環(huán)計(jì)數(shù)(C t)?;跓o(wú)模板對(duì)照 Ct值與標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性,該測(cè)定的檢測(cè)限為<10拷貝基因組/樣品。

 

 

 

部分產(chǎn)品信息:

貨號(hào)

品名

規(guī)格

濃度

品牌

N2070-10-L

 ATP Solution 

50 µmol

10 mM

Enzymatics

N2050-10-L

10 mM dNTP Solution Mix

100 µmol

10 mM

Enzymatics

N2010L

100 mM 75µmol dNTP Solution Set 

75 µmol

100 mM

Enzymatics

N2010-A-L

100 mM dATP Solution 

75 µmol

100 mM

Enzymatics

N2050L

100µmol dNTP Solution Mix 

100 µmol

25 mM

Enzymatics

Y9180L

10x Uracil Cleavage System 

750 Reactions

N/A

Enzymatics

P7670

2x HiFi PCR Master Mix 

1 rxn

2x

Enzymatics

Y9420L

5x ER/A-Tailing Enzyme Mix 

24 reactions

N/A

Enzymatics

Y9380L

E. coli Pyrophosphatase 

50 U

100 U/mL

Enzymatics

Y9030L

E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein 

1.5 mg

2.75 mg/ml

Enzymatics

Y9140-HC-L

End-Repair Mix (High Concentration) 

75 Reactions

1 Rxn/µL

Enzymatics

Y9140-LC-L

End-Repair Mix (Low Concentration) 

200 Reactions

1 Rxn/µL

Enzymatics

Y9080L

Endonuclease VIII 

10,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

P7600L

EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) 

10,000 U

200,000 U/mL

Enzymatics

X8010L

Exonuclease I 

30,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

X8020L

Exonuclease III 

50,000 U

100,000 U/ml

Enzymatics

P7010-HC-L

Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) 

10,000 U

50,000 U/ml

Enzymatics

P7010-LC-L

Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) 

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7060L

Klenow Fragment 

2,500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

X8030L

Lambda Exonuclease 

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7040L

M-MuLV Reverse Transcriptase 

100,000 U

200,000 U/ml

Enzymatics

P7090L

Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) 

3,000 U

30,000 U/ml

Enzymatics

P7140-HC-L

Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) 

100,000 U

400,000 U/ml

Enzymatics

P7140-LC-L

Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) 

100,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

P7610L

NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions 

250 Reactions

2X

Enzymatics

P7590L

Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase 

500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7460L

Poly(A) Polymerase 

1,000 U

5,000 U/mL

Enzymatics

Y9260L

RecA 

1.5 mg

2.0 mg/mL

Enzymatics

Y9220L

RNAse H 

5,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

Y9240L

RNAse Inhibitor 

20,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

L6010L

T3 DNA Ligase 

900,000 U

3,000,000 U/ml

Enzymatics

L6030-LC-L

T4 DNA Ligase 

150,000 U

120,000 U/ml

Enzymatics

L6030-HC-L

T4 DNA Ligase (Rapid) 

240,000 U

600,000 U/ml

Enzymatics

P7080L

T4 DNA Polymerase 

2,000 U

3,000 U/ml

Enzymatics

Y9130L

T4 Gene 32 Protein 

1.0 mg

10 mg/mL

Enzymatics

Y9040L

T4 Polynucleotide Kinase 

10,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

L6050L

T4 RNA Ligase 1 

10,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

L6080L

T4 RNA Ligase 2 

4,500 U

30,000 U/ml

Enzymatics

L6070L

T4 RNA Ligase 2 Truncated 

500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

L6020L

T7 DNA Ligase 

900,000 U

3,000,000 U/ml

Enzymatics

P7260L

T7 DNA Polymerase 

3,500 U

10,000 U/ml

Enzymatics

P7180L

T7 RNA Polymerase 

50,000 U

50,000 U/ml

Enzymatics

L6060L

Taq DNA Ligase 

20,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

P7110L

Taq DSC 2.0 DNA Polymerase 

1,250 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7250L

Taq-B DNA Polymerase 

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7620L

TaqIT 

5,000 U

50,000 U/mL

Enzymatics

P7070L

Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) 

6,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

G5020L

Thermolabile UDG 

500 U

1,000 U/ml

Enzymatics

Y9370L

Thermostable Pyrophosphatase 

1,250 U

2,000 U/ml

Enzymatics

G5010L

Uracil DNA Glycosylase 

10,000 U

2,000 U/ml

Enzymatics

P7511L

VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase 

500 U

2,000 U/ml

Enzymatics

P7520L

VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase 

500 U

2,000 U/ml

Enzymatics

L6030-W-L

WGS Ligase 

24 Reactions

N/A

Enzymatics

P7640L

ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit 

1000 Reactions

N/A

Enzymatics

P7020-HC-L

φ29 DNA Polymerase (High Concentration) 

2,000 U

100,000 U/ml

Enzymatics

P7020-LC-L

φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) 

2,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

 

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